时间:2023-03-15 14:54:04
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1.化学因子(1)酸和碱:酸能水解生物大分子或催化其水解。过氧乙酸是一种常见的抗感染因子,对残留的核酸具有很强的去除作用,而对ECM的影响较小;乙酸会破坏胶原成分,降低ECM的强度,而对硫酸盐黏多糖的影响较小。碱因其完全去除了ECM中的生长因子,严重影响其机械性能,基本只用于早期处理表皮的脱毛。
(2)低渗和高渗溶液:高渗溶液可以分离DNA和蛋白质,低渗溶液可以溶解细胞。为发挥最大作用,经常将低渗和高渗溶液交替使用,但此法耗时长,处理后的组织易水肿,且不能完全溶解掉细胞残余物,还需进一步处理。
(3)洗涤剂:分为离子型、非离子型和两性离子型洗涤剂。通过溶解细胞膜并将DNA从蛋白质中分离,脱细胞效果明显,然而这些洗涤剂会将ECM中的蛋白质成分去除,蛋白质的丢失程度随着洗涤时间的增加而增加。多种洗涤剂同时使用会增加ECM蛋白的丢失,优点是有利于脱细胞之后洗涤剂的去除。与酶相比,非离子型洗涤剂TritonX-100能够更有效的从致密组织中去除细胞成分。离子型洗涤剂十二烷基磺酸钠(SDS)相比于TritonX-100能更好的从致密的组织或器官中去除细胞核成分,同时保持其机械性能;在完全去除细胞核成分中起至关重要的作用,但是会引起一些超微结构的破坏和生长因子的丢失。两性离子型洗涤剂3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸(CHAPS)对薄的组织(比如肺)作用较强,但是对于较厚的组织,即使与SDS联合使用,脱细胞效果仍然很弱。需要注意的是,脱细胞之后必须将ECM中残余的洗涤剂去除,特别是SDS,它能够穿透入较厚和致密的组织,即使在较低浓度时仍对再种植的细胞显示毒性。
(4)醇类:甘油通过脱水和溶解细胞发挥作用;甲醇和乙醇能使蛋白质沉淀,进而破坏ECM的超微结构。
2.生物因子(1)酶:能够用于脱细胞的酶包括核酸酶、胰蛋白酶、胶原酶、脂肪酶、中性蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和α-半乳糖苷酶,去除细胞成分方面有较高的特异性。然而,用单一的酶来完全去除细胞成分难以达到预期的目的,且残留的酶不利于细胞再种植,并且存在诱发不利免疫应答的可能。核酸酶可以裂解核酸序列,可用于去除残余的核苷酸。胰蛋白酶是一种常用的脱细胞因子,然而,ECM中的蛋白质如胶原蛋白对胰蛋白酶的抵抗能力较弱,因此使用时应格外小心。与洗涤剂相比,胰蛋白酶对弹性蛋白和胶原蛋白破坏力较大,脱细胞速度较慢,但能更好的保护糖胺聚糖。胰蛋白酶脱细胞效果及对ECM的影响程度与时间相关,单独使用胰蛋白酶完整脱细胞需要很长的时间。值得注意的是,胰蛋白酶可以破坏组织的超微结构,有利于后续的脱细胞因子的渗透,因此在初始阶段使用胰蛋白酶可以起到较好的作用,特别是要从一些致密的组织中完全去除细胞核。脂肪酶有协助去脂作用。中性蛋白酶的脱细胞效果较好,但会伴随着ECM更大程度的破坏。(2)非酶因子:螯合物如乙二胺四乙酸(EDTA)和乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)有助于细胞从ECM蛋白中分离,但是,单独使用螯合物即使通过振荡也难以将表层细胞脱去。因此,它们经常和酶(如胰蛋白酶)或者洗涤剂联合使用。联合使用螯合物与高/低渗溶液脱细胞的效果尚不明确。3.物理和其他因子(1)温度:冻融技术能有效的溶解组织和器官中的细胞,对组织的超微结构仅有轻微影响。单次冻融可以减少不利的免疫应答,如白细胞浸润;应用多次循环冻融对ECM蛋白的含量影响较小。(2)机械振荡法和压力:机械振荡法可通过振荡产生的能量破坏细胞,多与其他方法联合使用,可将细胞从基底膜分离,然而不可避免的造成超微结构和基底膜完整性的破坏。静水压力所需时间较短,在血管或者角膜组织脱细胞时的效果比洗涤剂或者酶更有效,但是冰晶的形成会影响ECM的超微结构。(3)非热力学打孔技术:使用微秒的电脉冲流经组织或者组织中的剩余细胞,可以诱导产生细胞膜表面的微空隙,从而破坏细胞内微环境,继而导致细胞死亡。由于非热力学打孔技术的探针较小,能用它来脱细胞的组织较小,应用明显受限。
二、脱细胞支架的灭菌
脱细胞支架制备成功后将进行系列体内外实验,在此之前对支架的灭菌十分重要,常使用去除热原法来清除残余的内毒素、病毒和细菌DNA。生物支架可以置于酸或者其他溶剂中以达到灭菌的目的,但是该方法渗透能力不强,且会损伤重要的ECM成分;环氧乙烷对ECM的机械性能影响较大,并引起不利的免疫应答,进而影响移植后正常功能的发挥;γ射线、电子束辐射等灭菌方法会改变ECM的超微结构和机械性能;超临界二氧化碳对ECM和支架的机械性能的影响较其他方法小,目前成为一种替代方法。
三、肝脏脱细胞支架的制备方法
脱细胞器官优良的性能为其成功应用于肝脏带来希望。Shupe等首次报道了啮齿类动物肝脏的脱细胞,通过下腔静脉置管,门静脉切断,上腔静脉结扎,PBS去除血管内剩余血液,依次用浓度为1%、2%、3%的TritonX-100各300ml以5ml/min的速度灌注肝脏,以含0.1%SDS的PBS液300ml冲洗。脱细胞肝脏经HE染色,显示完整的ECM网状结构;免疫组化染色表明Ⅳ型胶原和层黏连蛋白均保留,且胶原存在于基质中,而层黏连蛋白存在于血管的基底膜中。将106个大鼠肝脏前体细胞WB344置于RPMI1640培养基中,通过置管的下腔静脉注入肝脏进行再种植,构建出组织工程肝脏。另有文献报道,经门静脉插管以1ml/min灌注梯度浓度的SDS(0.01%、0.1%、1%)各24h,用蒸馏水灌注15min、1%的TritonX-100灌注30min清除剩余的SDS。PBS冲洗1h后,从门静脉注入染色剂可以清楚地观察到完整的血管结构。将其中一叶置于0.1%的过氧乙酸中灭菌。组织学分析显示,在支架中几乎无细胞核结构;免疫组化分析Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤连蛋白、β1层黏连蛋白,结果表明其在ECM的结构和血管基底膜的完整性方面与正常肝脏相当,DNA含量分析证实支架中DNA低于3%。大鼠来源的肝细胞经门静脉以15ml/min灌入,3D动态培养2周,分别于种植后4h、1、2、5d行组织染色,结果表明4h时,大多数细胞存在于血管内或者血管周围,1d和2d时,细胞离开血管,分布到基质中。该文献首次报道了将肝细胞种植到支架上后白蛋白分泌、尿素合成等功能的发挥,再种植成功的肝脏被移植到单侧肾切除的大鼠体内。Baptista等采用小鼠、大鼠、雪貂、兔和猪,分别经由门静脉插入不同尺寸的导管,通过蠕动泵以5ml/min的速度注入总量约为40倍肝脏体积的蒸馏水,后以1%的Triton-X100和0.1%氨水灌注肝脏去除细胞,最后以蒸馏水去除残余洗脱剂。将人脐静脉内皮细胞和人胚胎肝细胞种植到肝脏支架中,同时通过门静脉以3ml/min循环灌注RPMI1640培养基16h,首次证实了人肝细胞前体细胞具有在脱细胞肝脏支架上生存的潜力。功能测定显示,培养液中的尿素和白蛋白水平明显高于单纯将人胚胎肝细胞置于培养液中的方法。另有文献报道一种改良的脱细胞方法,以RPMI1640培养基灌洗10min,再用混有SDS的磷脂酶A2冲洗30-60min,直到组织透明,流出液澄清,再以高渗盐水及核酸酶分别冲洗,直到灌洗液在280nm及260nm的吸光度皆呈阴性,最后以RPMI1640培养基冲洗2h,所制备支架具有将肝脏前体细胞分化成肝细胞和胆管上皮细胞的能力。然而,上述文献都仅限于啮齿类动物,Barakat等采用新的方法制备猪脱细胞支架,并进行人肝细胞种植:以SDS进行去细胞,右前叶作为种植细胞的支架,含有肝细胞生长因子的胚胎肝细胞和胚胎星状细胞作为种植细胞,灌注液中含有肝细胞生长因子和其他所需营养物质,通过测量灌注过程中氧分压、二氧化碳分压、乳酸、葡萄糖、尿素氮和白蛋白量进行肝脏代谢和合成功能的评估。结果表明,再生的肝脏呈现活跃的代谢能力,并保留白蛋白的合成能力,种植细胞分化为成熟的肝细胞。因此,ECM对于细胞的种植至关重要,具有支持细胞生长、促进前体细胞特异性分化的作用。Hammond等通过将肝脏脱细胞支架移植到正常肝脏和部分肝切除的肝脏中,证实了这一观点。首要的观察指标为肝细胞DNA的合成和肝组织渗透进入支架的程度;其次的观察指标为非实质细胞的DNA合成、肝重量的测定、肝功能测定以及移植物周边的细胞生长情况。结果令人振奋,支架种植到正常肝脏4d后,支架周边有更多的肝细胞增殖,7d后更多的肝脏组织渗透进入支架中;部分肝切除术后2d,种植支架的肝脏较单纯部分肝切除的肝脏有更多的肝细胞增殖。
一、编制依据招标文件及发包人对招标文件的解释。
企业管理层对招标文件分析研究结果。
工程现场情况。
发包人提供的信息和资料。
有关市场信息。
企业法人代表人的投标决策意见。
施工组织设计它显示投标人的技术和管理方案的可行性与先进性,以利于竞争取胜,因此要依靠企业管理层的智慧和经验,取得充分依据,发挥综合优势。
二、编制内容项目概况工程概况应说明工程特点;建设地点及环境特征;施工条件;项目管理特点及总体要求。
施工部署施工部署应标明项目的质量、进度、安全目标;拟投入的最高人数和平均人数;分包计划,劳动力使用计划,材料供应计划,机械设备供应计划;施工程序;项目管理总体安排等。
施工方案施工方案应包括施工流向和施工顺序;施工阶段划分;施工方法和施工机械选择;安全施工设计;环境保护内容及方法。
施工进度计划施工进度计划应包括施工总进度计划和单位工程施工进度计划,可采用网络图表示。
资源需求计划资源需求由劳动力需求;主要材料和周转材料需求;机械设备需求;预制品订贷需求;大型工具、器具需求等计划,可采用图表表示。
施工准备工作计划施工准备工作计划包括施工准备工作组织及时间安排;技术准备及编制质量计划;施工现场准备计划;作业队伍和管理准备计划;物资准备计划;资金准备计划等可采用图表表示。
施工平面图施工平面图包括施工平面图说明、施工平面图、施工平面图管理规划。
施工技术组织措施计划施工技术组织措施计划应有针对性和重点,主要内容有进度目标、质量目标、安全目标、季节施工、环境保护、文明施工等技术措施。
项目风险管理项目风险通过调查、分析、论证、预测其发生概率、后果很可能使项目产生损失的未来不确定项目风险管理包括风险因素和素识别一览表、风险可能出现的概率及损失估计、风险管理是重点、风险防范对策、风险管理责任。
信息管理信息管理是指项目实施过程中,对信息收集、整理、处理、储存、传递与应用等,对于信息管理也包含与项目经理相适应的信息流通体系,信息中心的建立规划,项目管理软件的选择与使用规划,信息管理实施规划等。
三、关于项目质量控制原则
1)项目质量控制应遵循GB/T19000族标准(2000版)和企业质量管理体系要求实施。
2)质量管理应坚持安全第一,预防为主的方针和计划、执行、检查、处理循环工作方法。
3)应满足施工技术标准和建设单位要求。
4)质量控制应包人、材料、机械、方法、环境。
5)质量控制必须实行样板制。
施工过程均应按要求三检制(自检、互检和交接检)。对隐蔽工程、指定部件和分项工程未经检验或已经检验但定为不合格,严禁转入下道工序。
6)应建立项目质量责任制和考评办法。
7)检验批、分项工程一定要经监理工程师检验和认可。
8)承包人对发包人、分包人对承包人负责,承包人对分包人工程还应负连带责任,分包人应接受承包人质量管理。
质量控制程序编制质量计划——实施计划(施工准备阶段、过程控制阶段、竣工验收阶段)。
质量计划项目质量计划是指项目应达到质量标准和如何达到这些标准的工作计划与安排,其基本原则之一是:施工质量是通过质量计划的实施所开展的质量保障活动达到的,而不是通过事后的质量检查得到的。质量管理从项目质量计划安排开始的,是通过对项目质量计划的实现的。
1)质量计划编制内容有:
(1)编制依据;
(2)项目概况;
(3)质量目标;
(4)组织机械;
(5)质量控制和管理组织协调系统的描述;
(6)必要的质量控制手段,施工过程,服务,检测和试验程序等;
(7)确定关键工序和特殊过程及作业的指导书;
(8)与施工阶段相适应的检验、试验、测量、验证的要求;
(9)更改和完善质量计划的程序。
2)施工准备阶段质量控制
(1)根据招投标文件和施工图纸,编制有效文件一览表;
(2)应进行图纸自审、会审、并形成文件;
(3)材料采购应进行选择和评价;
(4)应对全体人员进行质量知识培训;
3)施工阶段质量控制
(1)应按分项、检验批在施工前进行书面技术交底;
(2)工程变更一定要有联系单并经确认;
(3)工程测量应符合中前编制控制方案、测量点在妥善保护;
(4)材料采购一定要在合格名录中,进场必须验证,并经监理确认;
(5)材料搬运、储存应符合规定,并建立规范;
(6)现场材料、半成品、构配件、设备应进行标识;
(7)机械设备应按计划调配,并满足施工需求,对操作人员应进行资格确认,持证上岗;
(8)计量器具应符合有关规定要求;
(9)工序控制:
a)人员持证上岗;
b)按操作规程(企标)、作业指导书和技术交底文件进行施工;
c)工序检验、试验应符合规范要求,对不符合应进行及时处理;
d)管理人员应作好施工工序记录。
(10)特殊过程、指定控制点应按预先编制作业指导书实施。
(11)对成品、半成品应采取有效措施给予保护。
(12)对发生质量事故必须按建设工程质量管理条例有关规定处置。
4)竣工验收阶段质量控制
(1)施工单位必须在自检合格基础上才能交付进行竣工验收;
(2)竣工验收必须符合法定程序;
(3)竣工验收时查出质量缺陷应按不合格控制程序处置;
(4)相关人员应在验收文件签字;
(5)应按文明施工和环境保护要求撤离现场。
5)质量持续改进
(1)应对项目进行评价,识别质量持续改进区域,确定改进目标,选定解决办法;
(2)对验证中发现不合格产品和过程,应按规定进行鉴别、标识、记录、评价、隔离和处置;
1.2施工组织和工程造价之间的关系施工组织设计的内容主要包括工程概况与施工条件的分析、工程施工方案、工程施工进度和施工的平面图等。工程造价是工程项目施工建设的成本,是各个施工环节费用支出的总和。工程造价的重要内容之一即为优化施工组织设计,通过周密组织项目的施工和合理安排工程进度,从而提高工程施工的管理水平和机械设备的使用效率。同时,施工组织设计的优化可以降低工程的建设成本,从而确定工程造价。因此,可以说工程造价确定的主要依据即为施工组织设计,不同的施工组织设计对应着不同的工程造价。
2、施工组织设计中对工程造价影响的因素
2.1工程施工的方案对工程造价的影响施工方案是施工组织设计中的关键内容,其合理与否对工程造价高低有着直接的影响。在保障工程施工质量和工期进度的前提下,对施工方案进行优化是降低与控制工程造价的有效措施。施工方案的优化有定性分析与定量分析两种途径。定性分析是依据技术人员的施工与管理经验,对施工方案的优劣进行准确的判断;定量分析是利用投资额、工期指标、成本指标和平米造价等技术与经济指标优化施工方案。施工方案的正确合理性决定了工程单价的准确性,进而决定了工程造价的合理性。
2.2工程施工的进度对工程造价的影响工程的施工进度对工程造价的影响也不可忽视。在保障工程施工质量的前提下,缩短工程施工的工期不但可以降低工程成本支出,以利于建设施工单位更快的获取经济效益,而且还可以加快建设施工单位的资金周转,减少工程项目贷款投资的利息。工期的合理性是以工程项目建设满足规定要求为前提,所用费用最低做为衡量的标准,其主要由直接费用和间接费用组成,而总成本费用是两者相互叠加产生的,总成本费用最低时所对应的的工期即为最佳工期。因此,施工组织设计的时候,要做到建设材料、施工人员和机械设备的合理配置,从而使工程工期与最佳工期相接近。
2.3工程项目施工现场的平面布置对工程造价的影响在工程组织与施工中,建设施工单位常常忽视工程施工的平面布置图,在进行施工组织设计的时候,对工程设计的资料、施工现场地形地貌、建筑材料、运输路线和物资仓库与中转地等没有进行深入的了解,以及明确各施工项目工程之间的关系,从而导致不必要的建设成本增加。施工现场的平面布置图是设计单位依据项目施工特点与施工条件,对施工场地的所有设施设备在平面位置上进行合理设置而设计的,可以避免工程施工中出现反复搬迁施工设备、地下工程的反复开挖和土方的往返运输等情况,有效降低运输的费用和修建临时场地的费用等,对工程预算中直接费用的支出有着直接的影响。如果在施工过程中,建设施工单位严格贯彻落实施工现场的平面设置图,既可以加快工程进度,也可以提高建设施工单位的经济效益。
2.4运输组织计划对工程造价的影响运输组织计划在施工组织设计中占有重要的地位,其不但对工程施工进度有着直接的影响,而且在确定工程造价中也起着至关重要的作用,在工程项目施工的过程中占有很大的工作量。为了保障施工进度可以按照施工计划顺利执行,最大程度地降低工程项目施工的成本,建设施工单位要确保运输组织计划的合理性与可操作性,尽可能的使其满足如下要求:①运输的距离最短,总运输量尽可能最少;②以最少的运转次数满足施工建设要求,使运输材料可直达施工现场;③便于迅速的装卸材料和设备,以及运转和库存;④尽可能借助原有的交通条件,减少建设和完善临时运输相关设备的投入等。
2.5建设施工材料的价格对工程造价的影响人力资源、建设施工材料和机械设备等各项准备工作与合理配置是施工组织设计中至关重要的内容,其中建设施工材料费用在工程项目建设中所占的比重较大,约为建筑安装总费用的50%左右,有时可能会达到70%左右。因此,建设施工材料的价格对工程造价的影响举足轻重。可以影响建设施工材料价格的因素有很多,如材料产地、运输的方式、运输距离的远近和运费的高低等,因此建设施工单位在工程项目施工的时候,要采用招标的方法,尽可能的将材料的单价控制在最低。同时,建设施工单位还要对材料市场进行深入的调查和研究,结合不同产地材料价格、运输的方式和运费等,对不同供货方式材料价格进行计算,最终评估和判断出最合理、最经济实惠的材料采购方案,以有效降低材料费用的支出,进而控制工程造价。
水利水电工程通常情况下是由众多的单项工程所组成,所以较为容易产生施工干扰,其与一般性的土木建筑工程相比,难度要大很多,并且容易受水文条件、地形条件以及地址条件的影响,具有一定的困难性和复杂性。
2针对性。
水利水电工程中的施工组织设计大多以单个工程为对象,因此具有较强的技术性和综合性。其组织设计的内容需要满足工程项目业主、设计以及监理的共同要求,另一方面也必须合乎国家有关法律规定对于施工标准的规范要求。因此,水利水电工程的施工组织设计具有一定的针对性和适应性。
3动态性。
水利水电工程施工组织设计需要对施工工程总体进行统筹规划,同时应充分重视对施工现场的组织和管理,因地制宜、因时制宜的选择最优的施工方案,所以水利水电工程施工组织设计在一定程度上具有动态管理性。
二、施工组织设计分析
1施工导流设计。
作为一个系统性问题,施工导流设计需要对施工建筑设计、施工总进度以及总布置的导流程序等问题进行综合考虑,也同样也会对坝址的选择和水工建筑布局产生直接影响。除此之外,其还在一定程度上影响着施工总进度设计和工程预算设计。在进行水利水电工程施工导流设计时,首先需要对其与自然环境的适应程度作出考虑,特别是其与谁规律的适应程度。因为在通常情况相下,改变水规律要付出较大的代价,在某些情况下甚至无法对水规律作出改变,唯一可以选择的是增强施工导流的适应性。因此,作为施工组织设计的主体环节,应对施工导流设计中的截流、封堵、拦洪及蓄水进行合理有效控制,并根据渠道自身水流规律,对工程施工程序进行合理安排,保证施工的顺利进行。
2混凝土工程设计。
混凝土工程设计主要有建筑物预应力混凝土工程以及水流渠道混凝土工程,主干渠道的混凝土施工工程采用的是渠道衬砌的方式,进行现浇和部分预制。需要注意的是在渠道衬砌的过程中,注意对防水、防渗漏和防冻方面的控制,保持高水准的施工质量要求。在水利水电工程组织施工设计中,可以根据工程施工技术条件和施工规模的不同,通过集中设置混凝土生产系统的方式,对渠道和建筑施工进行混凝土供应。对于规模相对较大的建筑物来说,可以采取单设置独立的混凝土生产系统对其进行混凝土的供应。
3施工工艺设计。
施工组织设计中的施工工艺设计主要包括施工顺序、方法以及技术,其中施工技术作为施工工艺的重要组成部分,对其有重要的影响作用,只有在施工技术满足技术性及经济型要求时,才能开展下一步的施工工作。其研究的主体项目主要包含以下几点:(1)现有条件下,如何对某个时段或期限内的施工工作量进行合理制定。(2)如何实现施工导流和施工顺序、施工方法与施工顺序的有效结合,从而确保建筑物施工的技术性。根据施工计划中所需要的施工材料,进行水利水电工程的前期预算。在施工质量和施工效益得以有效保证的基础上,进行合理的施工工艺组织设计和管理。
4施工进度设计。
施工进度设计的任务是为了对各项施工活动进行时间规划,应保证施工进度依据施工方案和施工程序进行设计,并严格按照施工工期对项目时间做出计划性的控制。施工进度包括编制施工依据、各个分项工程的施工顺序、主要工程的工期控制以及关键施工工序的指标控制等内容。另一方面,在进行施工总进度编制时,应做到重点与非重点的兼顾,对于关键性的工程施工项目,应对施工人员及机械进行合理安排,保证施工的连续性及平衡性。对于临时建设项目和主体工程项目而言,应依据工程特点首先列出主要施工项目并对其工程施工量进行计算,从而绘制出施工进度表并进行定期考察。
5施工布置。
施工布置是水利水电工程施工组织设计在投标阶段的重要内容,主要可以根据项目施工工程的特点、施工规模以及施工条件,对水利水电工程施工期间所涉及到的交通运输、仓库运输以及给排水管线进行平面化和程度化布置,从而保证施工工程合理有序进行。
三、施工组织设计间的相互关系
1施工进度与施工强度的关系。
在施工组织设计中,只有在对施工强度有一个充分把握的前提下,才能根据施工强度及制定出施工进度计划,并在施工进度计划的指导下进行施工强度的控制。通过施工强度和施工进度计划的结合,继而制定出合适的工程强度指标。
2施工方法与施工导流之间的关系。
对于施工导流控制程序的研究,需要有恰当的施工方法作为保障。施工方法选择的正确性,会一定程度上对水利水电工程施工技术的选择产生影响,所以应在施工导流控制程序的基础上,制定出相对合理的施工制度。